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奶牛肝脏活体采样技术操作规程

发布时间:2012-11-19 16:36  文章来源: 国家奶牛产业技术体系  作者: 毕研亮等  点击量:

  一、目的

  活体采集奶牛的肝脏样品,活体采完肝脏样品后不影响奶牛的正常采食、产奶等各项生理活动。采集肝脏样品量为0.5-1g。

  二、药品与器材

  • 成年奶牛用的活体肝脏采样器,改进的活体肝脏采样器(外国专家提供),本操作使用改进的活体肝脏采样器。

  • 永久性记号笔

  • 手术用一次性手套

  • 手动剃须刀及吉列刀片

  • 70%酒精及酒精棉球

  • 复方碘液

  • 20mL、50mL的注射器及注射针头

  • 0.25%-1%的盐酸普鲁卡因溶液

  • 0.1%新洁尔灭溶液。

  • 灭菌纱布 10cm×10cm

  • 手术刀片#22及手术刀柄 #4

  • 三角缝合针及#3缝合线

  • 持针钳及止血钳

  • 高压蒸汽锅

  • 0.9%生理盐水

  • 收集肝脏样品的小烧杯

  • 容纳活体肝脏取样器及手术器械的大托盘, 托盘内装消毒液,用以浸泡采样器和手术器械。

  • 长期保存肝脏样品的液氮罐

  • 其它器材和药品

 

  

  图1 活体肝脏采样器                 图2 改进的活体肝脏采样器

 

  

  图3 李胜利教授与Shawn教授探讨取样器的使用方法

  活体肝脏采样器由外层套管、穿刺针、密封塞、套在穿刺针上的螺母组成。

  三、采样程序

  1. 采样前一天将手术器械、纱布、缝合线等消毒灭菌以备用。采样前15分钟将刀片、三角缝合针、肝脏采样器等放入盛有0.1%新洁尔灭溶液的托盘中浸泡消毒。

  2. 整个采样过程必须在奶牛站立的情况下完成,在采样过程中必须保持牛的安静,最大限度约束奶牛的活动。如果奶牛活动剧烈,可根据奶牛的体重肌肉注射少量的速眠新注射液以起到镇静作用。

  3. 将奶牛牵入保定架,锁定前后门,尽量限制奶牛的空间活动。

  4. 确定并用永久性记号笔标记采样部位。

  5. 对于成年的荷斯坦奶牛,采样部位一般在从髋结节到右前肢肘关节的连线和第10根与第11根肋骨间隙交叉处上移2.5-3.5 cm。对于体型较短的奶牛,采样部位最好是第11根肋骨和第12根肋骨之间。

 

 

  

  图4 奶牛的保定及手术部位的准备

 

  6. 用手动剃须刀将确定好的体表部位15厘米见方区域内的毛剃除。

  7. 用肥皂刷洗采样处及周围的皮肤,然后用清水洗涤2次。

  8. 采样部位用复方碘液消毒,待碘液干燥后用70%酒精棉球脱碘。

 

 

  

图5 手术部位消毒

 

  9. 用20mL注射器在采样手术部位注射0.25%-1%的盐酸普鲁卡因溶液15 mL,其中约10mL注射于皮下,约 5mL深入肌肉层。等待约15min以保证麻醉药起效。

  

  图6 麻醉

 

  10. 用复方碘液再一次消毒采样手术部位,碘液干燥后用70%酒精淋洗采样手术部位脱碘。

  11. 采样人员洗手,消毒,带上灭菌手套。助手负责准备手术刀和采样工具等。

  12. 用针尖刺麻醉部位皮肤以检查麻醉效果,如果奶牛的皮肤没有反应证明麻醉效果好,用手术刀在采样手术部位做一长度为1.5-2.0cm的垂直切口,切透皮肤。

  13. 用50mL注射器吸取灭菌生理盐水,然后从消毒液中取出肝脏活体取样器,用灭菌的生理盐水淋洗取样器,以洗掉采样器表面的消毒液。

  14. 采样人员手持采样器,保证采样器内层穿刺针和外层套管形成锋利的尖端。在与奶牛体表采样部位皮肤垂直的角度,稳稳的将采样器穿透腹壁,插入腹腔。在穿透腹壁腹膜后阻力立即大幅减小,手能感到有落空的感觉。

 

 

  

  图7 针尖垂直刺入皮肤

 

  15. 在采样器进入腹腔后,将采样器尖端朝向牛左前肢肘部方向,向胸腹部下方逐渐刺入肝脏,采样器与皮肤的夹角大约呈45度,此时奶牛可能会出现挣扎发应。

  16. 从腹腔将采样器刺入肝脏时,能感到阻力突然增加,此时将采样器内层穿刺针拉出约10cm,继续推进采样器,采样人员此时完全通过手感感觉采样器是否刺入肝脏及刺入深度 。

 

  

  图8 采样器穿透腹壁腹膜进入腹腔